(一)米氏常数是酶的特征常数之一，每一种酶都有它的Km值，Km值只与酶的结构和所催化的底物有关，与酶浓度无关。
(二)判断酶与底物亲和力的大小。Km值小，表示用很低的底物浓度即可达到最大反应速度的一半，说明酶与底物亲和力大。可用1/Km近似地表示亲和力，1/Km愈大，酶与底物的亲和力愈大，酶促反应愈易进行。
(三)判断哪些底物是酶的天然底物或最适底物(即Km值最小的底物)。
(四)判断正逆两向反应的催化效率。如一个反应的正逆方向由同一个酶催化，则Km值较小的那向反应催化效率较高。
(五)求出要达到规定反应速度的底物浓度，或根据已知底物浓度求出反应速度。
例如：已知Km值，求使反应达到95%Vmax时的底物浓度为多少?
解：95%Vmax=Vmax.[s]/Km+[s]
移项解出[s]=19Km