DNA变性
1.DNA变性
(一)DNA变性是二级结构的破坏,碱基对氢键断开,碱基堆积力遭到破坏,但不伴随共价键的断裂,这有别于DNA一级结构破坏引起的DNA降解过程。
(二)DNA变性后:黏度降低,浮力密度增加,核酸分子中碱基杂环的共轭双键,使核酸在260nm波长处有特征性光吸收。
(三)变性DNA在波长260nm的光吸收增强,称为增色效应。
(四)DNA的变性发生在一定的温度范围内,这个温度范围的中点称为融解温度,用Tm表示。
(五)当温度达到融解温度时,DNA分子内50%的双螺旋结构被破坏。
(六)DNA分子的GC含量越高,Tm值也越大。
(七)Tm值还与DNA分子的长度有关,DNA分子越长,Tm值越大。
(八)溶液离子浓度增高也可以使Tm值增大。
2.DNA复性
(一)分离的DNA双链可以自动退火(annealing),再次互补结合形成双螺旋,这个过程称为复性。
(二)复性后,变性引起的性质改变也得以恢复。
3.核酸杂交:不同来源的DNA可以杂交,DNA与RNA、RNA与RNA之间也可以杂交。
4.Southern印迹:DNA-DNA杂交
5.Northern印迹:DNA-RNA杂交技术。