工具酶作为试剂用于测定化合物浓度或酶活力的酶称为工具酶。
1.NAD(P)+或NAD(P)
H偶联的脱氢酶及其指示反应最常作为工具酶的脱氢酶是乳酸脱氢酶(LD)、苹果酸脱氢酶(MD)、谷氨酸脱氢酶(GLD)和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(C-6-PD)。前两种酶主要以NAD+或NAD为辅酶，GLD可以NAD+或NAD(P)+或其还原型为辅酶。NADH和NAD(P)H在340nm有特征性光吸收，可借此用分光光度计检测，还可通过荧光法及化学发光法测定。
2.偶联H202的工具酶及其指示反应
葡萄糖氧化酶、尿酸酶、甘油氧化酶、胆固醇氧化酶等工具酶分别用于葡萄糖、尿酸、甘油、胆固醇的测定，可使相应底物被氧化，生成H202，H2 02可通过下列指示反应来检测。
(一)使单一的色素原显色：色素原是一种无色的色素前身，在过氧化物酶(POD)存在下被H202氧化后可生成有色的色素。如邻联茴香胺(ODA)。
(二)使成对的色素原显色：必须有两个色素原共同存在，再在过氧化物酶(POD)的催化下生成色素。如酚和4-氨基安替比林作用，生成红色色素。
(三)发光反应：H2O2也可用化学发光反应来监测。