酶活力测定影响因素

1.反应速度

大多数酶促反应是可逆反应,其速度既受底物浓度的影响,也受产物生成量的影响。当底物浓度较高时,在反应的初期,其浓度变化甚微,产物生成量也很少,此时反应速度可看作是恒定的。酶反应动力学中所指速度就是反应的初速度。

2.底物浓度

米氏方程ν=νmax【S】/Km+【S】是反映酶促反应速度与底物浓度关系的方程式,其中Km称米氏常数。

Km值是酶的特征常数之一,只与酶的性质有关,而与酶浓度无关。不同的酶,Km值不同。同一个酶有几种底物时,则对每一种底物各有一特定的Km值,其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适底物或天然底物。

综上所述,根据酶的特性及定量原理,测定酶活力时,必须注意以下几点:

(一)酶促反应过程中,只有最初一段时间内反应速度与酶浓度成正比,随着反应时间的延长,反应速度即逐渐降低。

(二)要规定一定的反应条件,如时间、温度、pH等,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定,如温度不得超过规定温度的士1℃,pH应恒定。

(三)配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。

(四)标本要新鲜,由于绝大多数酶可因久置而活力降低,标本如无法及时测定,应保存于冰箱中。用血浆时,应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。有些酶在血细胞、血小板中的浓度比血清高,为此在采血、分离血清时,应注意防止溶血和白细胞的破裂。

(五)在测定过程中,所用仪器应绝对清洁,不应含有酶的抑制物,如酸、碱、蛋白沉淀剂等。